TECNICAS DE EDICIÓN GENETICA EN CANCER GASTRICO POR HELICOBACTER PYLORI

TEMA: Terapia génica para el tratamiento de cáncer

TIPO: Terapia génica de células somáticas in vivo

DIRIGIDO HACIA: ADN DE p53 y de genes MLH1 MSH2 MSH3

DIRIGIDO POR: Vectores adenovirales, gammaetovirus, lentivirus

ORGANO/SISTEMA/CELULA/TEJIDO: Células del tumor gástrico y epitelio normal del estómago

VIA DE ADMINISTRACIÓN: Inyección intravenosa de interferón

RESULTADOS:

Corto plazo: Protección de las células sanas a los agentes de toxicidad

Mediano plazo: Producción de respuestas que contrarresten la propagación de cáncer

Largo plazo: Producción de posibles métodos de control y curación de cáncer

TOMADO DE: https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0123901514702227

STEM CELLS EN CANCER GASTRICO POR HELICOBACTER PYLORI

TEMA: Células madre en el cáncer gástrico

TIPO DE STEM CELL: Células somáticas del epitelio del estómago

MÈTODO: Las células madre tienen la capacidad de diferenciarse y producir enfermedades. 

- Inyección de Lgr-EGFP-CreRT2/APC para activar el Cre dirigido por Lgr 5 lo que aumenta la formación de carcinomas

-Supresión dirigida de Klf4 que induce a formación de tumores

-Sobreexpón de Dclk1

- Modificación de células madre por infección de helicobacter pylori

RESULTADO:

Corto plazo: Entendimiento de la fisiología del cáncer y su relación con células madre

Largo pazo: Desarrollo de supresores de activación de fibroblastos por inhibición de factores derivados del cáncer junto con la herramienta para combatir cáncer 

Supresión o modificación de factores para transformar células cancerígenas

Las células madre de cáncer (CSC) a menudo se transforman en células madre específicas de tejido o células progenitoras de amplificación de tránsito desdiferenciadas. Varias poblaciones de células madre gástricas multipotentes (GSC) que residen en el estómago se han determinado para regular la renovación fisiológica del tejido y la reparación de lesiones. Estas poblaciones incluyen las Células Villin + y Lgr5 + en el antro, las células principales Troy + en el corpus y las Células Sox2 + que se encuentran tanto en el antro como en el corpus. 

Tomado de: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4284326/

https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3755024/#!po=39.7436

ADN RECOMBINANTE

ADN RECOMBINANTE EN LA NATURALEZA:  TRANSFECCIÓN

La transfección es un proceso que consiste en introducir nucleótidos en una célula, cuyo producto final es la transgénesis. En las últimas décadas se vienen desarrollando diferentes tipos de métodos como: biológicos, físicos y químicos que han permitido realizar esta introducción de nucleótidos hacia las células.
La transfección ha permitido expresar genes de interés en células eucariotas. Esta capacidad ha posibilitado obtener un mejor entendimiento de la biología celular, la biología molecular y la genética de las células. Al expresar proteínas en células de animales, se ha podido entender aspectos detallados de la síntesis proteica, los efectos de las mutaciones en su función en las proteínas, las interacciones entre éstas y las interacciones intercelulares. Además, esta tecnología ha llevado al desarrollo de animales transgénicos, a la fecundación in vitro, y a la posibilidad de usar la transferencia de genes para tratar desórdenes genéticos

 TOMADO DE: http://sisbib.unmsm.edu.pe/BVRevistas/biologist/v13_n1/pdf/rev1v13n1.pdf


ADN RECOMBINANTE EN CANCER DE ESTÓMAGO POR HELICOBACTER PYLORI: VACUNA ORAL RECOMBINANTE DE HELICOBACTER PYLORI

Se ha realizado un estudio para crear una vacuna recombinante con el objetivo de evaluar la eficacia, seguridad e inmunogenicidad de una vacuna recombinante oral de tres dosis de H. pylori en niños de China El objetivo principal de eficacia fue la aparición de infección por H. pyloridentro de 1 año después de la vacunación
La vacuna oral recombinante contra H. pylori fue efectiva, segura e inmunogénica en niños con H. pylori . Esta vacuna podría reducir sustancialmente la incidencia de infección por H. pylori ; sin embargo, se necesita un seguimiento durante un período más prolongado para confirmar la protección de la vacuna contra las enfermedades asociadas a H. pylori.

TOMADO DE: https://www.thelancet.com/journals/lancet/article/PIIS0140-6736(15)60310-5/abstract

WESTERN BLOT PARA CANCER DE ESTÓMAGO

El ensayo MP Diagnostics(MPD) HELICO BLOT 2.1 Western blot Kit Assay es un ensayo enzimático cualitativo para la detección de anticuerpos frente a Helicobacter pylori (H. pylori) en suero o plasma humanos, con la indicación adicional de estado de infección actual. Esta es una versión mejorada de HELICO BLOT 2.0 donde además del lisado bacterial, hay un antigeno recombinante de lato valor predictivo para la indicación de infección actual por H. pylori. El producto esta destinado para uno como prueba serológica para la detección tanto de infección actual como infección pasada con H. pylor

TOMADO DE:
https://translational-medicine.biomedcentral.com/track/pdf/10.1186/1479-5876-11-241

PRUEBA DE PCR PARA CANCER GASTRICO POR HELICOBACTER PYLORI: ARTICULO CIENTIFICO

TEMA: Detección por PCR de helicobacter pylori en muestras clínicas

OBJETIVOS: Este estudio se realizó con la finalidad de determinar una nueva manera de detección de helicobacter pilory y consecuencia de ésta cáncer gástrico.

MUESTRA: Heces almacenadas en el congelador de larga duración

TIPO DE ÁCIDO NUCLEICO: ADN genómico

EXTRACCIÓN ADN:

-Lisis: centrifugación, temperatura

-Separación: PBS

-Purificación: Cromatografía

GEN: 23S rRNA

TIPO DE PCR: PCR Anidada

PASO DE PCR:
-Preparación  de PCR en hielo con varios reactivos 
-Desnaturalización inicial: 95 ° C durante 2 min,  5 ciclos: 94 ° C durante 30 s, 57 ° C durante 30 s, y 72 ° C durante 30 s; luego 30 ciclos: 94 ° C por 15 s, 57 ° C por 15 s, y 72 ° C por 20 s.
-Preparacion de segunda muestra de PCR en hielo con reactivos.
-Desnaturalización inicial a 95 ° C durante 2 min, seguida de 25 ciclos: 94 ° C durante 10 sy 63 ° C durante 20 s.

VISUALIZACIÓN: EPO

SENCIBILIDAD: 91%

ESPECIFICIDAD: 85%

 TOMADO DE: 

https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3973746/?report=classic

Prueba de tamizaje y confirmatoria del cáncer de estómago por Helicobacter pylori

PRUEBA DE ALIENTO PARA HELICOBACTER PYLORI

Consiste en ingerir una cápsula, líquido o pudín que contiene urea “marcada” con átomos especiales de carbono. Normalmente, la muestra tiene sabor a limón. La H. pylori procesa la urea y, luego de pocos minutos, el individuo sopla dentro de un recipiente y expulsa el CO2. Si los átomos de carbono especial se encuentran en el aire exhalado, entonces se puede concluir que el microbio está presente. 

BIOPSIA

Las biopsias para saber si se trata de cáncer de estómago se hacen con más frecuencia durante la endoscopia superior. Si durante la endoscopia el médico observa cualquier área anormal en el revestimiento del estómago, se pueden pasar instrumentos por el endoscopio para tomar muestras y luego realizar una biopsia.

TOMADO DE:

-http://carefirst.staywellsolutionsonline.com/RelatedItems/167,helicobacter_pylori_urea_breath_ES

-https://www.cancer.org/es/cancer/cancer-de-estomago/deteccion-diagnostico-clasificacion-por-etapas/como-se-diagnostica.html

Alteración de la epigenómica en cáncer de estómago por H. Pylori

Perfiles de expresión génica en sangre total en niños infectados por H. pylori de forma permanente y transitoria y controles sanos.

En relación con las alteraciones epigenéticas, y en el contexto de infección persistente por H. pylori, se ha analizaron el estado de metilación de los genes Thrombospondin-1, Hypermethylated in cancer 1 y Gata binding protein-4, previamente asociados a cáncer gástrico. Entre los 810 genes diferencialmente expresados se incluían algunos asociados a procesos biológicos asociados a cáncer, tales como ciclo celular (TGFA, CDT1, NUSAP1, BTG3) y apoptosis o muerte celular programada (C3ORF38, GZMH, TIAM 1, IFNG, HIPK2, SLC5A8). Tomados en conjunto, estas publicaciones indican que alteraciones en perfiles de expresión y metilación de múltiples genes ocurriría en etapas muy tempranas de la vida, en el contexto de infección por H. pylori, incluso previo a la aparición de lesiones histológicas asociadas a la cascada premaligna del cáncer gástrico. Estudios longitudinales deberían indicar si la metilación de estos genes favorecería la progresión hacia lesiones premalignas de cáncer gástrico.

Tomado de: https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0370410616300742